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國(guó)產(chǎn)核酸蛋白檢測(cè)儀的發(fā)展與性能
層析分離技術(shù)是我國(guó)高?!渡治鰧?shí)驗(yàn)》中的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)。70年代后期研制的“核酸蛋白檢測(cè)儀”,使用某一波長(zhǎng)(280nm或254nm等)進(jìn)行定性檢測(cè)分離,用記錄儀描譜,長(zhǎng)期在高校實(shí)驗(yàn)室使用。在我國(guó)科技人員努力下,近年來(lái),市場(chǎng)上相繼出現(xiàn)了可代替記錄儀的“電腦采集器”、“電腦核酸蛋白檢測(cè)儀”、“雙波長(zhǎng)電腦核酸蛋白檢測(cè)儀”、“層析-電導(dǎo)聯(lián)用系統(tǒng)”等產(chǎn)品,迅速應(yīng)用到教學(xué)實(shí)驗(yàn)、科學(xué)研究和**生產(chǎn)領(lǐng)域。
一、檢測(cè)原理
所有紫外吸收檢測(cè)器工作原理都是基于光的吸收定律---朗伯-比耳定律。該定律指出,當(dāng)一束單色光(λ)輻射通過(guò)稀濃度物質(zhì)溶液時(shí),如果溶劑不吸收光,則液體的吸光度與吸光物質(zhì)的濃度和光經(jīng)過(guò)溶液的距離成正比。其關(guān)系式為:
A(λ)=a(λ)bc
A=-LgT=Lg1/T
二、層析裝置分類:
按描譜方式分有:記錄儀描譜和電腦描譜(外加采集分析器)
按檢測(cè)波長(zhǎng)分有:?jiǎn)尾ㄩL(zhǎng)檢測(cè)和雙波長(zhǎng)(多波長(zhǎng))同步檢測(cè)
按檢驗(yàn)器分有:核酸蛋白檢測(cè)和核酸蛋白檢測(cè)、電導(dǎo)檢測(cè)聯(lián)用
三.傳統(tǒng)檢測(cè)儀:
傳統(tǒng)層析實(shí)驗(yàn)裝置由單波長(zhǎng)核酸蛋白檢測(cè)儀(外加電腦采集器或?qū)㈦娔X采集器裝入檢測(cè)儀中也屬此類)、層析柱、恒流泵、部分收集器和記錄儀等部件構(gòu)成。用一種波長(zhǎng)(如280nm或254nm等)下對(duì)已知物質(zhì)(蛋白或核酸等)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)檢測(cè),高校實(shí)驗(yàn)室的層析實(shí)驗(yàn)裝置大多屬于此類。特點(diǎn)如下:
1、檢測(cè)前必須選定一種波長(zhǎng)(280nm、254nm)進(jìn)行檢測(cè),利用物質(zhì)特征波長(zhǎng)分離已知組分。
2、要求學(xué)生在檢測(cè)前一定要先調(diào)整透過(guò)率為,然后再調(diào)整吸光度為0。學(xué)生經(jīng)常會(huì)問(wèn):雖然透過(guò)率和吸光度在此點(diǎn)(T=,A=0)符合了A=lg(1/T)關(guān)系,但怎樣保證在測(cè)量范圍內(nèi)都符合朗伯--比爾定律?
3、傳統(tǒng)檢測(cè)儀為保證測(cè)量讀數(shù)落在儀器有效測(cè)量范圍內(nèi),在儀器面板上都設(shè)有靈敏度選擇裝置(2.0A、1.0A、0.5A、0.2A、0.1A、0.05A等)。因此,測(cè)量前要選擇合適的靈敏度;②真正吸光度值是儀器顯示數(shù)與靈敏度的乘積;③測(cè)量中不要改變靈敏度,否則可能會(huì)帶來(lái)基線變化。
4、傳統(tǒng)檢測(cè)儀在不同靈敏下的測(cè)量結(jié)果均為0-10mv直流信號(hào),將此信號(hào)輸出到記錄儀或電腦采集器。顯然,記錄紙或電腦屏上的吸光度也并非樣品實(shí)際的吸光度,也應(yīng)受到儀器靈敏度的調(diào)制。
四、新型檢測(cè)儀
以對(duì)蛋白、核酸、肽等生物大分子物質(zhì)的檢測(cè)、分離和純化為目的,新型層析實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中的電腦核酸蛋白檢測(cè)系統(tǒng)具有以下特點(diǎn):
1、系統(tǒng)智能調(diào)整吸光度到0.000,透光率到。,并在測(cè)量范圍內(nèi)的吸光度和透過(guò)率嚴(yán)格符合A=Lg(1/T)。
2、單波長(zhǎng)檢測(cè)或雙波長(zhǎng)同步檢測(cè)。
3、系統(tǒng)自帶數(shù)據(jù)采集工作站,檢測(cè)、采集、軟件工作站一體化系統(tǒng)集成。分析軟件具有實(shí)時(shí)描譜、分析參數(shù)、圖譜保存、圖譜打印、圖譜編輯等功能,峰高、峰寬、峰面積、歸一化、保留時(shí)間、半峰寬、峰底寬、面積含量、純度、層析柱分辯率等參數(shù)。
近出現(xiàn)的“單波長(zhǎng)核酸蛋白檢測(cè)_電導(dǎo)檢測(cè)聯(lián)用系統(tǒng)”、“雙波長(zhǎng)核酸蛋白檢測(cè)_電導(dǎo)檢測(cè)聯(lián)用系統(tǒng)”和“三波長(zhǎng)核酸蛋白檢測(cè)電導(dǎo)檢測(cè)聯(lián)用系統(tǒng)”等產(chǎn)品,為科學(xué)研究、尋找目標(biāo)物分離條件和提高工作效率了新方法。
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